Hyvämikroskooppipitää olla kolme ominaisuutta:
Hyvä resoluutio: Resoluutiokyky tarkoittaa kykyä tuottaa erillisiä kuvia lähekkäin sijoitetuista kohteista, jotta ne voidaan erottaa kahdeksi erilliseksi kokonaisuudeksi. Resoluutio:
Noin 0,2 mm (200 μm) paljaalla silmällä
Optinen mikroskooppi on noin 0,2 μm
Elektronimikroskopia on noin 0,5 nm
. Resoluutio riippuu taitekertoimesta. Öljyllä on korkeampi taitekerroin kuin ilmalla.
Hyvä kontrasti: voidaan parantaa edelleen värjäämällä näyte.
Hyvä suurennus: Tämä saavutetaan käyttämällä koveria linssejä.
Kirkaskenttä- tai valomikroskopia
Kirkaskenttä- tai valomikroskopia tuottaa tummia kuvia vaaleampaa taustaa vasten.
tummakenttämikroskopia
Periaate: Tummakenttämikroskopiassa esineet näyttävät kirkkailta tummaa taustaa vasten. Tämä voidaan saavuttaa käyttämällä erityisiä darkfield-kondensaattoreita.
Käyttökohteet: Käytetään tunnistamaan eläviä, värjäytymättömiä soluja ja ohuita bakteereja, kuten Spirochaetes, joita ei voida havaita valomikroskopialla.
vaihekontrastimikroskooppi
Se visualisoi eläviä soluja luomalla kontrastieroja solujen ja veden välille. Se muuttaa hienovaraiset erot taitekertoimessa ja solutiheydessä helposti havaittavissa oleviksi muutoksiksi valon voimakkuudessa.
Hyödyllinen opiskelussa:
mikrobien liikettä
Määritä elävien solujen muoto
Tunnista bakteerikomponentit, kuten endosporit ja inkluusiokappaleet.
Fluoresenssimikroskooppi
Miten se toimii: Kun fluoresoivat väriaineet altistetaan ultraviolettivalolle (UV) valolle, ne virittyvät ja fluoresoivat, eli ne muuttavat tämän näkymätön, lyhyen aallonpituuden säteen pidemmän aallonpituiseksi valoksi (näkyväksi valoksi).
Sovellukset: Epifluoresenssimikroskopialla on seuraavat sovellukset:
Autofluoresoi, kun se asetetaan UV-valoon, kuten syklosporiiniin
Mikro-organismit, jotka on päällystetty fluoresoivilla väriaineilla, kuten atriolioranssi malarialoisille (QBC) ja aurinolilla Mycobacterium tuberculosis -bakteerille.
Immunofluoresenssi: Se käyttää fluoresoivilla väriaineilla leimattuja vasta-aineita havaitsemaan solun pinta-antigeenejä tai vasta-aineita, jotka sitoutuvat solun pinta-antigeeneihin. On olemassa kolme tyyppiä: suora IF, epäsuora IF ja virtaussytometria.
elektronimikroskooppi
Sen keksi Ernst Ruska vuonna 1931. Se eroaa valomikroskopiasta eri tavalla.
EM:iä on kahta tyyppiä:
Transmissio EM (MC-tyyppi, tutkii sisäistä rakennetta, resoluutio 0,5 nm, antaa kaksiulotteisen kuvan)
Scanning EM (tutkii pintaa 7 nm:n resoluutiolla ja tarjoaa 3D-näkymän)
Transmissioelektronimikroskoopin periaatteet
Näytteen valmistelu: Suorita seuraavat vaiheet kennoilla valmistaaksesi erittäin ohuita näytteitä (paksuus 20-100 nm)
Kiinnitys: Kiinnitä solut glutaraldehydillä tai tetroksidilla niiden stabiloimiseksi.
Kuivaus: Sitten näyte dehydratoidaan käyttämällä orgaanista liuotinta, kuten asetonia tai etanolia.
Upottaminen: Näyte upotetaan muovipolymeeriin, joka sitten kovettuu muodostaen kiinteän massan. Useimmat muovipolymeerit ovat veteen liukenemattomia. Siksi näytteet on kuivattava kokonaan ennen upottamista.
Leikkaus: Näyte leikataan sitten ohuiksi osiksi ultramikrotomilla ja osat asennetaan metallilevyille (kupari).
Jäädytysetsaustekniikka: Tämä on vaihtoehtoinen menetelmä solujen sisällä olevien organellien visualisoimiseksi näytteen valmistelua varten.
Solut jäädytetään nopeasti, sitten kuumennetaan → rikotaan veitsellä sisäisten organellien paljastamiseksi → sublimoidaan → peitetään platina- ja hiilipinnoitteilla.
Toimenpiteitä EM-kontrastin parantamiseksi ovat:
Värjäys raskasmetallisuolojen liuoksilla, kuten lyijysitraatilla ja uranyyliasetaatilla
Negatiivinen värjäys raskasmetalleilla, kuten fosfovolframihapolla tai uranyyliasetaatilla.
Varjostus: Näyte päällystetään ohuella platina- tai muu raskasmetallikalvolla 45 asteen kulmassa siten, että metalli osuu mikro-organismeihin vain toiselta puolelta.
